高效液相色谱法（二） 流动相流过色谱柱时

2、高效液液分配备谱法：液液分配色谱法是液相流动相和固定相都是液体的液相色谱法。利用样品组分在互不相溶的色谱两种液相中分配系数的不同得以实现分离和分析。流动相和固定相为两种互不相溶的高效液体，二者之间有一个明显的液相分界面，流动相流过色谱柱时，色谱很大面积上与固定相接触，高效流动相中的液相样品组分在两相之间很快进行平衡分配，由于它们在两相之问相对溶解度的色谱差异，会以不同速度流经色谱柱，高效从而得到分离。液相

液液分配色谱法的色谱特点：可使用多种溶剂，固定液抗冲刷能力强，高效不需要预饱和，液相再现性能非常稳定；分离适用性广，色谱从非极性化合物到极性化合物，都可以作其分离对象；为改善分离度可以进行梯度洗脱，能做高精度定量分析。基于这些特点，液液分配色谱法广泛地用于各种样品中农药残留的分析测定。

3、离子交换色谱法：离子交换色谱法是根据离子交换能力大小的原理进行分离的液相色谱法。离子交换色谱法通常使用的是低交换容量的离子交换剂，这种交换剂的表面有离子交换基团。带负电荷的交换基团（如磺酸基和羧酸基）可用于阳离子的分离，带正电荷的交换基团（如季铵盐）可用于阴离子的分离。以阴离子交换为例，在库仑力的作用下，样品阴离子以及淋洗液中的阴离子（也称为淋洗离子）都与固定相中带正电荷的交换基团相互作用。样品阴离子不断地进入固定相，又不断地被淋洗离子交换而进入流动相，在两相中达到动态平衡，不同的样品阴离子与交换基的作用力大小不同，电荷密度大的离子与交换基的作用力大，在树脂中的保留时问就长，于是不同的离子相互分离。

离子交换色谱法固定相，主要有以下类型：微粒树脂型、表面多孔壁、硅胶键合相多孔微粒。硅胶骨架上引入各种离子基团，或涂渍键合有机离子交换剂。流动相多采用在水溶液中含有一定离子强度的缓冲液，或与水混溶的有机溶剂，如甲醇、乙醇、乙腈、二氧六环等。

离子交换色谱法特点：以水（加入相应的电解质）作为淋洗液。现广泛地应用于无机离子的分离。在水溶液中解离度较高的少数农药品种，可采用电导检测器测定。

4、空间排阻色谱法空间排阻色谱法是依据分子大小、形状而分离的液相色谱法。用化学惰性的具有网状结构的多孔性物质凝胶作固定相，试样组分按分子大小进行分离，其作用近似于分子筛效应。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙及凝胶孔穴旁流过，体积大的分子不能渗透到凝胶缝隙里去，而较早地被淋洗出来；中等体积分子产生部分渗透作用；小分子可以渗透到孔穴里去，因此较晚被冲洗出来，从而达到分离的目的。水或水溶液作流动相的凝胶色谱称为凝胶过滤色谱，有机溶剂作流动相的凝胶色谱称为凝胶渗透色谱。

凝胶色谱固定相有3种类型：软性凝胶（如网状交联多聚葡萄糖等）、半刚性凝胶（如交联聚苯乙烯等）、刚性凝胶（如多孑L硅胶等）。流动相为水、缓冲盐溶液、乙醇、四氢呋喃、甲苯、间甲苯酚、N，N一二甲基甲酰胺等。

空间排阻色谱法特点：非离子型的高分子化合物，样品分子质量差别愈大愈易分离；司测聚合物的分子质量分布；是一种最稳定的分离手段，不会引起样品变质和损失。

（三）高效液相色谱法的基本组成

高效液相色谱仪由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、计算机控制和数据处理系统（含工作站软件）组成。

1、输液系统

输液系统一般由储液器及脱气装置、高压输液泵、梯度洗脱装置构成，其功能是给分离系统提供稳定的能将}昆合组分分离的高压液体。

（1）储液器：储液器一般是玻璃或聚四氟乙烯衬里的塑料容器，容积0.5～2L。有时也用500mL溶剂瓶。流动相中会溶解空气（水更明显），含有微粒杂质，因此流动相在转入储液器前必须过滤和脱气。制备好的流动相一般是先过滤后脱气。对于拥有在线脱气装置的仪器只需要过滤就可以正常工作。过滤器采用全玻璃系统，依据色谱柱内径和填料颗粒细度选用0.22μm或0.45μm水系或有机系的微孔滤膜进行过滤。置于储液器底部的输液导管，需要安装孔径lOμm的不锈钢质或铝质或聚四氟乙烯材料的过滤头，该过滤头要定期（不宜超过7d）清洗，特别是在水相中的，使之保持通畅，避免输液管路内产生气泡。流动相脱气是非常重要的，若气泡吸人高压泵液缸，会导致压力不稳或停止输液。

（2）脱气装置：在高效液相色谱仪工作期间，每天或每时每刻都要对流动相进行脱气。脱气有3种处理方式。

①超声波振荡脱气加真空脱气法（5min+5min）：将储液器置于清洗用超声波振荡5min，然后再用微型真空泵或循环水式真空泵进行脱气5min。有文献报道，将上述两种方法联合使用脱气效果最佳。在充装流动相的密闭容器中，抽真空使溶解气体从流动相中逸出的方法不适合按比例混合好的流动相脱气，因为长时间的抽真空会改变流动相的配比，可能会使组分的保留时间发生明显的变化。另外，使用该方法脱气的流动相只能满足高压梯度洗脱。

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